【实验原理】
盐析现象是指—般蛋白质在高浓度盐溶液中溶解度下降,故向其溶液中加入中性盐至一定浓度时,蛋白质即自溶液中沉淀析出。盐析作用与两种因素有关:
①蛋白质分子被浓盐脱水;
②分子所带电荷被中和。
蛋白质的盐析作用是可逆过程,用盐析方法沉淀蛋白质时,较少引起蛋白质变性,经透析或用水稀释时又可溶解。
盐析不同的蛋白质所需中性盐浓度与蛋白质种类及pH有关。分子量大的蛋白质(如球蛋白)比分子量小的(如清蛋白)易于析出。球蛋白在半饱和硫酸铵溶液中即可析出,而清蛋白需在饱和硫酸铵溶液中才能析出。
【 试剂 】
1.鸡蛋清的氯化钠溶液(一份鸡蛋清加10份的0.9%氯化钠溶液)
2.固体硫酸铵
3.10%氢氧化钠溶液
4..1%硫酸铜溶液
【实验操作】
1.取鸡蛋清氯化钠溶液约2ml于 试管 中,加入硫酸铵粉末,至硫酸铵饱和不再溶解为止,此时溶液颜色为乳白色,用滤纸过滤。
2.取滤液做双缩脲反应,检查滤液中有无蛋白质存在。
蛋白质沉淀用1ml 蒸馏 水溶解后作双缩脲反应,证明盐析的蛋白质重新溶解于水而未引起变性。试管编号1234567
磷酸溶液的浓度(mol/L)124681012
磷酸溶液的加入量(滴)1 1 1 1111
混合溶液的PH值543.532.521.5
盐析时(NH4)2SO4
饱和溶液的用量(滴)10766666
【蛋白质沉淀反应—蛋白质的盐析作用】相关文章:
★ 蛋白质盐析实验
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